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如何選擇適合實(shí)驗(yàn)的 QIAGEN 質(zhì)粒試劑盒?—— 全維度選擇指南

更新時(shí)間:2025-11-13點(diǎn)擊次數(shù):403

選擇 QIAGEN 質(zhì)粒試劑盒需圍繞實(shí)驗(yàn)規(guī)模、DNA 質(zhì)量需求、操作效率、質(zhì)粒特性四大核心維度,結(jié)合具體實(shí)驗(yàn)參數(shù)(如培養(yǎng)體積、目標(biāo)產(chǎn)量、下游應(yīng)用)精準(zhǔn)匹配。以下為分步驟選擇邏輯及關(guān)鍵參考依據(jù):


image.png

一、第一步:根據(jù) “實(shí)驗(yàn)規(guī)模" 定基礎(chǔ)規(guī)格(核心:培養(yǎng)體積 + 目標(biāo)產(chǎn)量)

實(shí)驗(yàn)規(guī)模直接決定試劑盒的 “規(guī)格等級(jí)"(小規(guī)模 / 中規(guī)模 / 大規(guī)模),需先明確單次實(shí)驗(yàn)的細(xì)菌培養(yǎng)體積和所需質(zhì)粒產(chǎn)量,對(duì)應(yīng)不同試劑盒系列:

1. 小規(guī)模實(shí)驗(yàn)(培養(yǎng)體積≤10ml,產(chǎn)量≤50µg)

適合場(chǎng)景:快速驗(yàn)證(如克隆篩選、酶切驗(yàn)證)、小批量預(yù)實(shí)驗(yàn)、高通量樣本處理(96 孔板)??蛇x試劑盒及關(guān)鍵參數(shù)對(duì)比:

試劑盒類型

培養(yǎng)體積
3-4×10? cells/ml

目標(biāo)產(chǎn)量

操作時(shí)間

核心優(yōu)勢(shì)

下游適配場(chǎng)景

QIAGEN Plasmid Mini Kit

3ml

≤20µg

80min

轉(zhuǎn)染級(jí)純度,適配 QIAcube 自動(dòng)化

小規(guī)模轉(zhuǎn)染、體外轉(zhuǎn)錄

QIAprep Spin Miniprep Kit

1-5ml

5-50µg

30min

分子生物學(xué)級(jí),快速離心操作

常規(guī)克隆、測(cè)序

Quicklyse Miniprep Kit

1-3ml

8-15µg

9min

超快速(9 分鐘完成),測(cè)序級(jí)

緊急篩選、高通量測(cè)序

96 孔板系列(如 QIAprep 96 Turbo

1-5ml /

4-20µg /

45min

適配 BioRobot 自動(dòng)化,高通量

96 樣本同步處理

2. 中規(guī)模實(shí)驗(yàn)(培養(yǎng)體積 25-500ml,產(chǎn)量 100-500µg)

適合場(chǎng)景:常規(guī)實(shí)驗(yàn)室批量制備(如多次轉(zhuǎn)染、測(cè)序文庫(kù)構(gòu)建、蛋白表達(dá)模板)??蛇x試劑盒及關(guān)鍵參數(shù)對(duì)比:

規(guī)格等級(jí)

推薦試劑盒

培養(yǎng)體積(高 / 低拷貝)

目標(biāo)產(chǎn)量(高拷貝)

操作時(shí)間

核心優(yōu)勢(shì)


Midi

QIAGEN Plasmid Midi Kit

25ml(高)/100ml(低)

75-100µg

150min

轉(zhuǎn)染級(jí),重力流操作,穩(wěn)定


Midi

QIAfilter Plasmid Midi Kit

25ml(高)/100ml(低)

75-100µg

120min

過(guò)濾澄清(替代離心),更快


Maxi

QIAGEN Plasmid Maxi Kit

100ml(高)/500ml(低)

300-500µg

160min

中通量轉(zhuǎn)染首-選,適配低拷貝


Maxi

HiSpeed Plasmid Maxi Kit

150-250ml(高)

300-750µg

80min

超快速(比常規(guī)快 50%),轉(zhuǎn)染級(jí)

緊急批量轉(zhuǎn)染

3. 大規(guī)模實(shí)驗(yàn)(培養(yǎng)體積≥500ml,產(chǎn)量≥1mg)

適合場(chǎng)景:大量質(zhì)粒儲(chǔ)備(如動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、基因治療研究、工業(yè)級(jí)制備)??蛇x試劑盒及關(guān)鍵參數(shù)對(duì)比:

規(guī)格等級(jí)

推薦試劑盒

培養(yǎng)體積(高 / 低拷貝)

目標(biāo)產(chǎn)量(高拷貝)

操作注意事項(xiàng)

Mega

QIAGEN Plasmid Mega Kit

500ml-2.5L(高),不推薦低拷貝

≤2.5mg

可配 QIAfilter 過(guò)濾組件,真空澄清

Mega

EndoFree Plasmid Mega Kit

500ml-2.5L(高)

≤2.5mg

無(wú)內(nèi)毒素(≤0.1EU/µg),基因治療用

Giga

QIAGEN Plasmid Giga Kit

2.5-5L(高),不推薦低拷貝

≤10mg

需配合中央真空系統(tǒng),適合大規(guī)模生產(chǎn)

Giga

QIAfilter Plasmid Giga Kit

2.5-5L(高)

≤10mg

過(guò)濾澄清,減少離心步驟耗時(shí)

二、第二步:根據(jù) “下游應(yīng)用" 定 DNA 質(zhì)量等級(jí)(核心:純度 / 內(nèi)毒素要求)

不同下游實(shí)驗(yàn)對(duì) DNA 純度(如蛋白殘留、內(nèi)毒素)要求差異極大,需根據(jù)實(shí)驗(yàn)類型明確 “質(zhì)量等級(jí)",排除不符合的試劑盒:

下游實(shí)驗(yàn)類型

核心質(zhì)量要求

推薦試劑盒系列

需規(guī)避的試劑盒

真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染(尤其是敏感細(xì)胞)

轉(zhuǎn)染級(jí)純度(無(wú)蛋白 / RNase)、低內(nèi)毒素(≤10EU/µg

QIAGEN Plasmid Kits、QIAfilter Kits

僅分子生物學(xué)級(jí)的 QIAprep Spin/Quicklyse

基因治療、動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)

無(wú)內(nèi)毒素(≤0.1EU/µg

EndoFree Plasmid Kits

常規(guī) Plasmid Kits、HiSpeed Kits

體外轉(zhuǎn)錄、PCR 擴(kuò)增

無(wú) RNase 殘留、高純度

QIAGEN Plasmid KitsMini/Midi

未去除 RNase 的快速試劑盒

常規(guī)克隆、酶切驗(yàn)證

分子生物學(xué)級(jí)純度

QIAprep Spin、Quicklyse

高成本的 EndoFree/Mega 系列

BAC/PAC/P1 大構(gòu)建體提取

適配大片段(150-250kb

QIAGEN Large-Construct Kit

常規(guī) Mini/Midi Kit(片段易斷裂)

三、第三步:根據(jù) “操作效率" 匹配流程需求(核心:時(shí)間 + 自動(dòng)化)

若實(shí)驗(yàn)有 “時(shí)效性需求"(如緊急實(shí)驗(yàn))或 “高通量 / 自動(dòng)化需求"(如 96 樣本同步處理),需優(yōu)先匹配操作時(shí)間短、支持自動(dòng)化的試劑盒:

1. 時(shí)間敏感型實(shí)驗(yàn)(需快速出結(jié)果)

超快速需求(30 分鐘):選Quicklyse Miniprep Kit9min) 或HiSpeed Plasmid KitsMidi/Maxi,80-100min);

常規(guī)快速需求(30-60 分鐘):選QIAprep Spin Miniprep Kit30min) 或QIAfilter Midi Kit120min,過(guò)濾替代離心)。

2. 自動(dòng)化 / 高通量需求

96 孔高通量:選QIAprep 96 Plus/Turbo Miniprep Kit,適配 BioRobot Universal System 自動(dòng)化平臺(tái),單次處理 96 樣本;

單樣本自動(dòng)化:選QIAGEN Plasmid Mini/Maxi Kit,適配 QIAcube Connect 自動(dòng)化系統(tǒng),減少手動(dòng)操作誤差。

四、第四步:根據(jù) “質(zhì)粒特性" 優(yōu)化選擇(核心:拷貝數(shù) + 片段大?。?/span>

質(zhì)粒的拷貝數(shù)(高 / / 極低) 和片段大?。ǔR?guī)質(zhì)粒 / BAC / 黏粒) 會(huì)影響試劑盒的 “適配性",需針對(duì)性選擇:

1. 按 “質(zhì)??截悢?shù)" 調(diào)整

高拷貝質(zhì)粒(如 pUCpBluescript,拷貝數(shù) 300-1000):幾乎適配所有規(guī)格,優(yōu)先選常規(guī)系列(如 Plasmid Mini/Midi),無(wú)需額外擴(kuò)增,推薦用LB 培養(yǎng)基(避免 TB/2xYT rich 培養(yǎng)基,易導(dǎo)致雜質(zhì)增多);

低拷貝質(zhì)粒(如 pBR322、pACYC,拷貝數(shù) 10-20):需選 “支持低拷貝" 的規(guī)格,如Plasmid Midi100ml 培養(yǎng))、Plasmid Maxi500ml 培養(yǎng)),可添加 170mg/L 氯霉素?cái)U(kuò)增拷貝數(shù),擴(kuò)增后按高拷貝體積選擇;

極低拷貝質(zhì)粒(如 pSC101,拷貝數(shù)≤5):僅推薦Plasmid Maxi500ml 培養(yǎng))、Plasmid Mega2.5L 培養(yǎng)),需配合 “極低拷貝專用 protocol"(額外異丙醇沉淀步驟),避免用 Giga 規(guī)格(不推薦低拷貝)。

2. 按 “質(zhì)粒片段大小" 調(diào)整

常規(guī)質(zhì)粒(10kb):所有系列均適配;

黏粒(35-50kb):選Plasmid Maxi/Mega,產(chǎn)量可達(dá) 400µgMaxi)、2.5mgMega);

BAC/PAC/P1150-250kb):僅推薦QIAGEN Large-Construct Kit,含 exonuclease buffer 去除基因組 DNA 污染,常規(guī)試劑盒易導(dǎo)致大片段斷裂。

五、第五步:核對(duì) “細(xì)節(jié)參數(shù)" 排除沖突(核心:洗脫體積 + 結(jié)合容量)

最后需確認(rèn)試劑盒的 “細(xì)節(jié)參數(shù)" 是否匹配實(shí)驗(yàn)需求,避免因小參數(shù)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)受阻:

洗脫體積:若需高濃度 DNA(如顯微注射),選洗脫體積小的試劑盒(如 QIAprep Spin Miniprep Kit,固定 50µl);若需大體積稀釋,選洗脫體積可變的系列(如 Plasmid Mini Kit,推薦 50µl,可調(diào)整);

結(jié)合容量:避免 “過(guò)載"—— 如目標(biāo)產(chǎn)量 30µg,不可選結(jié)合容量≤20µg Plasmid Mini Kit,需選 QIAprep Spin(結(jié)合容量 50µg);

配套試劑:若需 “無(wú)內(nèi)毒素處理",優(yōu)先選 EndoFree 系列(自帶內(nèi)毒素去除緩沖液),而非常規(guī)系列 + 額外補(bǔ)充協(xié)議(成本更高)。

 

image.png

流程圖解

通過(guò)以上五步,可精準(zhǔn)匹配實(shí)驗(yàn)需求與試劑盒特性,避免 “選貴不選對(duì)" 或 “規(guī)格不足導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗"。若仍有疑問(wèn),可聯(lián)系 QIAGEN 代理商——柏萊源(天津)生物 科技有限公司,獲取更詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)資料!


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